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神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長(zhǎng)因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時(shí)，可出現(xiàn)一定程度的分化，長(zhǎng)出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。
人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，不僅能獲得生長(zhǎng)的膠質(zhì)細(xì)胞，也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說(shuō)來(lái)，膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長(zhǎng)不穩(wěn)定，不易自發(fā)轉(zhuǎn)化，但對(duì)外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。
一、設(shè)備： 無(wú)菌操作設(shè)備。
二、大型設(shè)備CO2 培養(yǎng)箱：恒溫5%、10%CO2維持培養(yǎng)液中pH值。
倒置顯微鏡：用于每天觀察貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
解剖顯微鏡，用于準(zhǔn)確地取材。
常溫冰箱：-4℃，用于保存各種培養(yǎng)液，解剖液和鼠尾膠。
低溫冰箱：-20℃--80℃，用于儲(chǔ)存血清酶，貴重物品和試劑。
電熱干烤箱：用于消毒玻璃器皿。
高壓消毒鍋：用于消毒培養(yǎng)皿，手術(shù)器械。
過(guò)濾器：配制解剖液、培養(yǎng)液，必須過(guò)濾后才可使用，以去除細(xì)菌。
滲透壓儀，pH劑，天平等。
三、培養(yǎng)器皿及手術(shù)器械
1、培養(yǎng)皿：常用35mm塑料及玻璃皿，解剖取材用15mm-90mm直徑。
2、培養(yǎng)板，24-40孔，可用于開(kāi)放培養(yǎng)。
3、培養(yǎng)瓶：
4、吸管，常用1，5，10ml，均需泡酸、洗滌、滅菌后方可使用。
5、各類培養(yǎng)液貯存器。
6、小型手術(shù)器械。
準(zhǔn)備：
一、配制培養(yǎng)液
（1）解剖液：以無(wú)機(jī)鹽（去除Ca2+ , Mg2+）加葡萄糖配制成PBS緩沖液，保持一定的滲透壓和pH值。
（2）基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MEM）：主要為多種氨基酸，加入葡萄糖，雙蒸餾水溶解。
（3）接種培養(yǎng)液：用于胰酶消化后的細(xì)胞分散，做成細(xì)胞懸液，其成分為MEM含1%谷氨酰胺，另加入10%馬血清，當(dāng)天配制。
（4）維持培養(yǎng)液：接種后24h，全部換成此液，后每2周換一次，每次換1/2。其成分為MEM中含5%馬血清，1%谷氨酰胺，及適量的支持性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
二、培養(yǎng)基質(zhì) 常用鼠尾膠、小牛皮膠，多聚賴氨酸，再涂膠
三、消毒培養(yǎng)皿的備用。所有培養(yǎng)器皿均需清水沖洗2-3d，達(dá)兩次ddH2O，每遍洗刷3-4次，加塞包裝，置于烤箱中干燥消毒，于培養(yǎng)前1天進(jìn)行。
神經(jīng)細(xì)胞分散培養(yǎng)
（一）選材 常用胚胎動(dòng)物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過(guò)也有認(rèn)為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質(zhì)以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細(xì)胞成活率高，顆粒細(xì)胞正在分化；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經(jīng)成活率高。
（二）取材。腦則取出相應(yīng)組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓則固定于瓊脂板上，用小刀將其要成背腹兩側(cè)，分別培養(yǎng)。
（三）細(xì)胞分離與接種。神經(jīng)組織用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接種液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用細(xì)口吸管吹打細(xì)胞懸液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上層細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，預(yù)置細(xì)胞密度，接種于培養(yǎng)皿（1×106），做電生理應(yīng)為5×105或更低。
素爾細(xì)胞庫(kù)提供遺傳變異細(xì)胞系、正常組織來(lái)源細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、工程細(xì)胞系、干細(xì)胞系，涉及人類，大鼠、小鼠、鳥(niǎo)類、倉(cāng)鼠、魚(yú)類、貓類、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長(zhǎng)鼻袋鼠等。
SUER1073(XR) DU 145細(xì)胞
SUER1074(XR) DU4475細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1075(XR) DV-90細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞
SUER1076(XR) EB1細(xì)胞伯基特淋巴瘤細(xì)胞
SUER1077(XR) EB2細(xì)胞伯基特淋巴瘤細(xì)胞
SUER1078(XR) EBC-1細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1079(XR) ECC10細(xì)胞小細(xì)胞腺癌細(xì)胞
SUER1080(XR) ECC12細(xì)胞小細(xì)胞腺癌細(xì)胞
SUER1081(XR) EC-GI-10細(xì)胞
SUER1082(XR) EFE-184細(xì)胞
SUER1083(XR) EFM-19細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1084(XR) EFM-192A細(xì)胞
SUER1085(XR) EFO-21細(xì)胞漿液性癌細(xì)胞
SUER1086(XR) EFO-27細(xì)胞粘液癌膠樣癌細(xì)胞
SUER1087(XR) EHEB細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病-小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤細(xì)胞
SUER1088(XR) EJM細(xì)胞漿細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞
SUER1089(XR) EM-2細(xì)胞慢性髓樣白血病爆炸階段細(xì)胞
SUER1090(XR) EN細(xì)胞
SUER1091(XR) EOL-1細(xì)胞急性髓性白血病細(xì)胞
SUER1092(XR) EPLC-272H細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1093(XR) ES-2細(xì)胞透明細(xì)胞癌清晰細(xì)胞癌亮細(xì)胞癌細(xì)胞
SUER1094(XR) ESS-1細(xì)胞中層混合腫瘤細(xì)胞
SUER1095(XR) EVSA-T細(xì)胞
SUER1096(XR) EW8細(xì)胞
SUER1097(XR) EWS502細(xì)胞
SUER1098(XR) F-36P細(xì)胞急性髓性白血病細(xì)胞
SUER1099(XR) F5細(xì)胞
SUER1100(XR) FaDu細(xì)胞 鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1101(XR) FTC-133細(xì)胞濾泡性癌細(xì)胞
SUER1102(XR) FTC-238細(xì)胞濾泡性癌細(xì)胞
SUER1103(XR) FU97細(xì)胞彌漫性腺癌細(xì)胞
SUER1104(XR) FU-OV-1細(xì)胞漿液性癌細(xì)胞
SUER1105(XR) G-292, clone A141B1細(xì)胞
SUER1106(XR) G-361細(xì)胞
SUER1107(XR) G-401細(xì)胞
SUER1108(XR) G-402細(xì)胞
SUER1109(XR) GA-10細(xì)胞伯基特淋巴瘤細(xì)胞
SUER1110(XR) GAMG細(xì)胞
SUER1111(XR) GB-1細(xì)胞星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
SUER1112(XR) GCIY細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞
SUER1113(XR) GCT細(xì)胞
SUER1114(XR) GDM-1細(xì)胞急性髓性白血病細(xì)胞
SUER1115(XR) GI-1細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞
SUER1116(XR) GMS-10細(xì)胞星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
SUER1117(XR) GOS-3細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞
SUER1118(XR) GP2d細(xì)胞腺癌細(xì)胞
SUER1119(XR) GRANTA-519細(xì)胞套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
SUER1120(XR) GR-M細(xì)胞
SUER1121(XR) GSS細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞
SUER1122(XR) GSU細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞
SUER1123(XR) H4細(xì)胞
SUER1124(XR) HARA細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1125(XR) HCC1143細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1126(XR) HCC-1171細(xì)胞非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
SUER1127(XR) HCC1187細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1128(XR) HCC-1195細(xì)胞混合腺鱗狀癌細(xì)胞
SUER1129(XR) HCC-1359細(xì)胞大細(xì)胞癌細(xì)胞
SUER1130(XR) HCC1395細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1131(XR) HCC1419細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1132(XR) HCC1428細(xì)胞
SUER1133(XR) HCC-1438細(xì)胞大細(xì)胞癌細(xì)胞
SUER1134(XR) HCC-15細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1135(XR) HCC1500細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1136(XR) HCC1569細(xì)胞化生性癌細(xì)胞
SUER1137(XR) HCC-1588細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1138(XR) HCC1599細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1139(XR) HCC1806細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1140(XR) HCC-1833細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞
SUER1141(XR) HCC-1897細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1142(XR) HCC1937細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1143(XR) HCC1954細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1144(XR) HCC202細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1145(XR) HCC-2108細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤
SUER1146(XR) HCC2157細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1147(XR) HCC2218細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞
SUER1148(XR) HCC-2279細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞
SUER1149(XR) HCC-2814細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞
SUER1150(XR) HCC2935細(xì)胞非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
SUER1151(XR) HCC-33細(xì)胞小細(xì)胞癌細(xì)胞
SUER1152(XR) HCC364細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤
SUER1153(XR) HCC-366細(xì)胞
SUER1154(XR) HCC38細(xì)胞
SUER1155(XR) HCC4006細(xì)胞
SUER1156(XR) HCC-44細(xì)胞
SUER1157(XR) HCC-56細(xì)胞
SUER1158(XR) HCC70細(xì)胞
SUER1159(XR) HCC-78細(xì)胞
SUER1160(XR) HCC827細(xì)胞
SUER1161(XR) HCC-827-GR5細(xì)胞
SUER1162(XR) HCC-95細(xì)胞
SUER1163(XR) HCT 116細(xì)胞
SUER1164(XR) HCT-15細(xì)胞
SUER1165(XR) HCT-8細(xì)胞
SUER1166(XR) HDLM-2細(xì)胞
SUER1167(XR) HD-MY-Z細(xì)胞
SUER1168(XR) HDQ-P1細(xì)胞
SUER1169(XR) HEC-108細(xì)胞
SUER1170(XR) HEC-151細(xì)胞
SUER1171(XR) HEC-1-A細(xì)胞
SUER1172(XR) HEC-1-B細(xì)胞
SUER1173(XR) HEC-251細(xì)胞
SUER1174(XR) HEC-265細(xì)胞
SUER1175(XR) HEC-50B細(xì)胞
SUER1176(XR) HEC-59細(xì)胞
SUER1177(XR) HEC-6細(xì)胞
SUER1178(XR) HEK TE細(xì)胞
SUER1179(XR) HEL細(xì)胞
SUER1180(XR) HEL 92.1.7細(xì)胞
SUER1181(XR) Hep 3B2.1-7細(xì)胞
SUER1182(XR) Hep G2細(xì)胞
SUER1183(XR) Hey-A8細(xì)胞
SUER1184(XR) HGC-27細(xì)胞
SUER1185(XR) HH細(xì)胞
SUER1186(XR) HK-2細(xì)胞
SUER1187(XR) HL-60細(xì)胞
SUER1188(XR) HLC-1細(xì)胞
SUER1189(XR) HLE細(xì)胞
SUER1190(XR) HLF細(xì)胞
SUER1191(XR) HLF-a細(xì)胞
SUER1192(XR) HMC-1-8細(xì)胞
SUER1193(XR) HMCB細(xì)胞
SUER1194(XR) HMEL細(xì)胞
SUER1195(XR) HOS細(xì)胞
SUER1196(XR) HPAC細(xì)胞
SUER1197(XR) HPAF-II細(xì)胞
SUER1198(XR) HPB-ALL細(xì)胞
SUER1199(XR) Hs 172.T細(xì)胞
SUER1200(XR) Hs 229.T細(xì)胞
SUER1201(XR) Hs 255.T細(xì)胞
SUER1202(XR) Hs 274.T細(xì)胞
SUER1203(XR) Hs 281.T細(xì)胞
SUER1204(XR) Hs 294T細(xì)胞
SUER1205(XR) Hs 343.T細(xì)胞
SUER1206(XR) Hs 571.T細(xì)胞
SR-786細(xì)胞
（四）抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)。培養(yǎng)3-5d后，也有人認(rèn)為培養(yǎng)7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)。
（五）觀察。接種6-12h，開(kāi)始貼壁，并有集合現(xiàn)象，細(xì)胞生長(zhǎng)突起明顯，5-7d膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，7-10d膠質(zhì)細(xì)胞成片于神經(jīng)細(xì)胞下面，形成地毯，2周時(shí)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)豐滿，四周暈光明顯，一個(gè)月后，有些神經(jīng)細(xì)胞開(kāi)始退化，變形，甚至出現(xiàn)空泡，一般培養(yǎng)2-4周宜。
但神經(jīng)細(xì)胞只能增大，而不能增殖，只能原代，不能傳代，不會(huì)有細(xì)胞周期，而且隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)量在下降，但膠質(zhì)細(xì)胞可以，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也可以。在培養(yǎng)過(guò)程中，早期9-12d時(shí)，有較多的神經(jīng)細(xì)胞死亡，這是一次死亡階段，應(yīng)注意保持條件的恒定。在此之后存活下去的細(xì)胞一般突起長(zhǎng)而多，且相互形成突觸。
（六）常用培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)有：FCM的蛋白總量分析；膜片鉗與離子通道的分析；免疫組化分析；
但免疫組化分析應(yīng)注意，由于抗體直接作用于活細(xì)胞，不易穿透活細(xì)胞，故對(duì)核內(nèi)抗原定位時(shí)，首先考慮膜對(duì)抗體的通透性問(wèn)題。常用化學(xué)試劑以增加其通透性或采用冰凍方法解決。
在免疫組化中，或其它組織學(xué)染色中，常用不同的染色方法以區(qū)分不同細(xì)胞，如半乳糖腦苷脂對(duì)小樹(shù)突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記明顯；GFAP對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞具有特異性染色等。這對(duì)研究神經(jīng)系統(tǒng)中膠質(zhì)細(xì)胞功能具有極大的應(yīng)用價(jià)值。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以往多被忽視，其在腦血管疾?。ㄈ缛毖該p傷）、退行性疾?。ㄈ鏏D、PD）、損傷后膠質(zhì)細(xì)胞的填充等具有不可忽視的作用。它也是神經(jīng)細(xì)胞功能和營(yíng)養(yǎng)支持的物質(zhì)基礎(chǔ)。
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